ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程:
1.實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2.加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100uL,37°C孵育1小時(shí);
3.吸棄,加檢測(cè)溶液A100uL,37°C孵育1小時(shí);
4.洗板3次;
5.加檢測(cè)溶液B100uL,37°C孵育30分鐘;
6.洗板5次;
7.加TMB底物90uL,37C孵育10-20分鐘;

8.加終止液50uL,立即450nm讀數(shù)。

ELISA檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):

1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2,濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫
助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品fl*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)(x5xn)。
5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
7,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶
標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.如以說(shuō)明書(shū)有異,以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)
ELISA檢測(cè)試劑盒操作技術(shù)要求:
1、加樣量的準(zhǔn)確與否,直接影響抗原抗體結(jié)合物的濃度,直至最后顯色的深淺。吸嘴插入血清不可太深,若插入太深,吸嘴外壁可能粘連太多血清,輕微的抖動(dòng)動(dòng)即可將吸咀外壁的血清濺入其它包被孔中,造成交叉污染。加樣時(shí)應(yīng)盡可能的垂直加樣,并加在包被孔的底部,不可加在孔的上部。標(biāo)本量大時(shí),可考慮使用排槍加試劑,可提高速度,但使用排槍時(shí)應(yīng)注意吸嘴一定要裝好,不可松動(dòng),否則會(huì)影響加樣量的準(zhǔn)確度。加樣時(shí)保持顯色劑不外流,顯色劑應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
2、加樣時(shí)間間隔對(duì)結(jié)果也有一定的影響,在競(jìng)爭(zhēng)法試驗(yàn)中,理論上應(yīng)該是標(biāo)本與酶標(biāo)抗體混合后同時(shí)加入反應(yīng)孔,若標(biāo)本先于酶標(biāo)抗體加入反應(yīng)孔,則標(biāo)本會(huì)先與包被抗體進(jìn)行反應(yīng),造成特假陽(yáng)性。若是有干擾物質(zhì)存在時(shí)表現(xiàn)明顯,在公平條件下,干擾物質(zhì)與包被抗體的結(jié)合能力會(huì)低于標(biāo)本,而在非公平條件下,干擾物質(zhì)會(huì)優(yōu)先與包被抗體進(jìn)行結(jié)合,出現(xiàn)假陽(yáng)性。做HBcAb項(xiàng)目時(shí),若標(biāo)本與酶加樣時(shí)間間隔太長(zhǎng),會(huì)引起吸光度的趨勢(shì)性變化,會(huì)造成吸光度的降低。特別是針對(duì)臨界值標(biāo)本,出現(xiàn)假陽(yáng)性。